Wie funktionieren bestimmte gentechnische Methoden, die dringend benötigte Ergebnisse liefern sollen? Welches Verfahren ist für ein Experiment am besten geeignet? Welche Kontrollen sind sinnvoll? Wie genau muss ein Puffer angesetzt werden und wie war das noch mal mit der Reihenfolge im Pipettierschema? In der 5. Auflage dieses bewährten Laborhandbuches werden molekularbiologische Methoden in Form von eindeutigen und reproduzierbaren Arbeitsvorschriften präsentiert, um die täglichen Hürden des Laboralltags zu meistern. Es richtet sich an Bachelor-, Master- oder Diplomstudierende sowie an Technische Assistenten, die neue Methoden etablieren wollen, und erfahrene Wissenschaftler zum schnellen Nachschlagen.Die Autoren sind in Lehre und Forschung oder in der Industrie tätig und geben hier ihr Wissen und ihre jahrelange Laborerfahrung weiter. Die meisten Methoden und Rezepte sind erfolgreich etabliert, andere wurden erst aktuell eingeführt. Zu Beginn eines jeden Abschnitts wird der Leser über die wichtigsten Konzepte informiert. Es folgt ein praktischer Teil mit Arbeitsanleitungen, die Schritt für Schritt das Erlernen und genaue Anwenden der Methoden ermöglichen. Besonderer Wert wurde auf Sicherheitshinweise und das Aufzeigen möglicher Fehlerquellen gelegt.Inhaltsübersicht:1 Allgemeine Methoden2 Gelelektrophoresen3 Isolierung von DNA4 Polymerase-Kettenreaktion (PCR)5 Klonierung von cDNA (cDNA-Genbank)6 Klonierung von genomischer DNA (genomische Genbank)7 Isolierung und Markierung von RNA8 RNA-Interference9 Gewebepräparation10 Detektion von Protein und Nucleinsäure auf Membran11 In situ-Hybridisierung12 Transfektion von Säugerzellen13 Transformationsmethoden für filamentöse Pilze14 Genexpression in E coli und Insektenzellen: Reinigung rekombinanter Proteine15 Das Pichia pastoris-Expressionssystem16 Verminderung der Genexpression über Ribozym-Targeting17 Analyse der Genregulation18 Peptidarrays auf Cellulosemembranen19 Genexpressionsanalyse mit Microarrays20 Text- und sequenzbasierte Datenbank-Abfragen in der BioinformatikAnhang 1 Sequenzierung von DNAAnhang 2 Proteinidentifizierung und SequenzierungIn der 5. Auflage wurden neben der Überarbeitung der grundlegenden Kapitel zu den molekularbiologischen Methoden die Kapitel zu RNAi, Bioinformatik und zu Microarrays deutlich ausgebaut. Ein Kapitel zur Fixierung und Aufbereitung von Gewebe ist neu hinzugekommen. Damit ist dieses Buch wiederum ein unverzichtbares Hilfsmittel für jedes molekularbiologische Labor.