Vorwort zur 1. Auflage12Vorwort zur 2. Auflage13Vorwort zur 3. Auflage131 Das Leben und seine Bestandteile1.1 Der Aufbau von DNA und RNA171.2 Der genetische Code201.3 Die Gene221.3.1 Die Genstruktur in Prokaryoten221.3.2 Genstruktur in Eukaryoten 241.4 Proteine 261.5 Die Zelle302 Grundlagen der Arbeit im Labor2.1 Wasser342.2 Messung des pH-Werts352.3 Puffer362.4 Waagen362.5 Mikropipetten382.6 Gefäße im Labor402.7 Zentrifugen412.8 Mischen und Konzentrieren442.8.1 Konzentrieren452.8.2 Pufferwechsel 452.9 Probenlagerung462.10 Steriles Arbeiten462.11 Geräte für den Aufschluss von Geweben492.12 Pflege und Aufzucht von Escherichia coli512.12.1 Nährmedien522.12.2 Antibiotika532.12.3 Lagerung von Bakterien553 Aufreinigung von Nukleinsäuren3.1 Gegenspieler erfolgreicher DNA- und RNA-Isolationen593.1.1 Nukleasen593.1.2 Scherkräfte603.1.3 Chemische Verunreinigungen603.1.4 EDTA und zweiwertige Ionen: das Yin und Yang der Molekularbiologie613.2 Extraktion von Nukleinsäuren623.3 Die weitere Aufreinigung der DNA643.3.1 Phenolextraktion643.3.2 Ethanolfällung653.3.3 Isopropanolfällung673.3.4 PEG-Fällung 683.3.5 Entfernen von Polysacchariden mit CTAB683.3.6 Tropfendialyse683.4 Silica Matrices693.4.1 Von Nukleinsäuren und Silica Matrices693.4.2 Übersicht über den Einsatz von Kits703.5 Ausgewählte DNA Aufreinigungsverfahren713.5.1 Die Plasmidpräparation aus E. coli 713.5.2 Die Isolation von DNA aus Pflanzen mit CTAB723.5.3 Isolation von DNA aus Blut oder Zellkulturen743.5.4 Isolation hochmolekularer DNA753.6 Die Isolation von RNA763.7 Tipps zum Erzielen hoher Ausbeuten bei der Isolation von Nukleinsäuren783.8 Quantifizierung von Nukleinsäuren793.8.1 DNA-Bestimmung im Photometer793.8.2 Konzentrationsbestimmung mittels optischer Dichte814 Polymerase-Kettenreaktion4.1 Prinzip der Polymerase-Kettenreaktion854.2 Die Komponenten der PCR864.2.1 Die Ausgangs-DNA864.2.2 Thermostabile DNA-Polymerasen 864.2.3 Puffer, Magnesium und dNTPs894.2.4 Primer914.3 Geräte für die PCR934.4 Die Standard-PCR944.5 Ausgewählte PCR-Methoden944.5.1 Two-Step PCR944.5.2 Gradienten-PCR und Touch-Down PCR964.5.3 Nested PCR974.5.4 Multiplex PCR974.5.5 Einführen von Restriktionsschnittstellen984.5.6 Reverse Transkriptions-PCR (RT-PCR)994.5.7 Kolonie-PCR1024.5.8 Quantitative PCR1034.6 Anwendungen der PCR1054.7 Optimierung der PCR-Reaktion1055 Klonieren für Einsteiger5.1 Restriktionsenzyme1095.1.1 Restriktionsenzyme des Typs II1105.1.2 Restriktionsenzyme im Labor1135.1.3 Methylasen und Typ IIM-Enzyme1155.1.4 Typ IIS-Enzyme1165.2 Ligation1165.3 (De)Phosphorylierung von DNA1185.3.1 Dephosphorylierung1185.3.2 Phosphorylierung 1195.4 Enzyme für spezielle Aufgaben 1215.5 Die Transformation von E. coli 1215.6 Der Weg zum klonierten Gen 1235.7 Der ungerichtete Einbau einer amplifizierten DNA in einen Vektor1235.7.1 Die Klonierung über eine Restriktionsstelle1245.7.2 TA-Klonierung und TOPO-Cloning 1255.7.3 Klonierung in ein Letal-Plasmid 1265.7.4 Zyklische Blunt End Klonierung 1265.8 Der gerichtete Einbau von DNA in einen Vektor 1275.9 Wenn es mal nicht klappt1296 Vektoren6.1 Plasmide 1326.2 Klonierungsplasmide1356.2.1 Blau-Weiß-Screening1356.2.2 Letalvektoren1386.3 Expressionsplasmide 1396.3.1 Promotoren für Expressionsvektoren1406.3.2 Weitere regulative Sequenzen1416.3.3 Expression in das Periplasma1416.3.4 Einschlusskörperchen [Inclusion Bodies]1416.3.5 Tag-Sequenzen1426.4 Reportergene1426.5 Phagen 1466.6 Phagemide1476.7 Shuttle-Vektoren1476.8 Künstliche Chromosome: YACs, BACs und PACs1486.9 Hefen als Klonierungs- und Expressionssystem1496.9.1 Hefe als Modellorganismus1496.9.2 Vektoren für Hefe1516.9.3 Transformation von Hefe1526.10 Pflanzen als Bioreaktoren 1526.10.1 Die Transformation von Pflanzen1536.10.2 Transiente Transformationsverfahren1556.11 Die Tran